蓝萼甲素通过靶向TOP2A/CDK1信号通路抑制线粒体裂变缓解哮喘气道重塑的作用机制
朴艺花;丁宁坡;商凤祥;宋艺兰;延光海;王知广;目的 探索蓝萼甲素（GLA）通过拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)/周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)信号通路抑制卵清蛋白（OVA）诱导哮喘小鼠气道重塑的作用机制。方法 选取Balb/c小鼠40只随机分为5组，对照组、模型组、GLA低剂量组、GLA高剂量组和地塞米松组，每组8只。通过免疫组织化学染色、ELISA等方法检测GLA对气道重塑的影响；利用生物信息学方法预测GLA的作用新靶点；利用STRING数据库筛选TOP2A的作用靶点，利用免疫共沉淀验证二者相互作用关系。在体外，利用GLA、siRNA干扰白细胞介素-4(IL-4)刺激的人气道上皮细胞BEAS-2B，利用Western Blot法检测TOP2A、表皮生长因子受体（EGFR）、整合素β1(Integrin β1)、黏着斑激酶（FAK）、β-catenin、CDK1和动力相关蛋白1(DRP1)表达。结果 GLA干预能够显著降低OVA诱导的哮喘气道重塑、气道平滑肌增厚、气道周围胶原沉积，肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞数量、IL-4等促炎细胞因子表达，以及血清IgE水平。筛选出GLA新的作用靶点是TOP2A，后者在哮喘气道重塑模型肺组织中高表达，GLA干预能下调其表达。在体外利用GLA和si-TOP2A干预后能显著下调IL-4诱导的TOP2A、EGFR、Integrin β1、FAK和β-catenin表达。进一步研究发现TOP2A与CDK1具有相互作用关系，si-TOP2A可下调CDK1表达，CDK1敲低可显著下调磷酸化DRP1表达。结论 GLA可能通过靶向TOP2A/CDK1信号通路减轻哮喘气道重塑，为临床诊断和治疗哮喘气道重塑提供实验依据。
同种异体肾被膜下移植CD24+肾上皮细胞缓解小鼠急性缺血再灌注肾损伤机制研究
张雨心;李大伟;王梦婷;王世博;刘文明;马鸿倩;张秋秋;金晓妍;鄢和新;目的 探究同种异体肾被膜下移植CD24+肾上皮细胞治疗小鼠缺血再灌注急性肾损伤(AKI)的效果及作用机制。方法 通过流式分选技术获取小鼠肾脏CD24+肾上皮细胞并进行传代扩增；C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组(n=8，仅假手术)、模型对照组(n=8，单侧肾脏缺血再灌注加对侧切除)和CD24+细胞治疗组(n=8,AKI造模后肾被膜下移植受试细胞)，造模24 h后处死小鼠，取血清检测生化指标[肌酐、尿素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]，并进行肾组织的病理学评估及巨噬细胞染色。构建小鼠骨髓来源的巨噬细胞的M1极化模型，与CD24+肾上皮细胞共培养，通过流式细胞术及实时荧光定量聚合酶链反应检测巨噬细胞的极化状态。结果 成功获取CD24+肾上皮细胞并可稳定传代；模型对照组小鼠血清肌酐、尿素含量以及肾脏病理损伤较正常对照组均显著升高，细胞治疗组小鼠血清生化学指标及病理损伤较模型对照组均显著下降，细胞治疗组小鼠肾脏中M1型巨噬细胞浸润减少(P<0.05,P<0.01)；体外共培养实验显示，CD24+共培养组巨噬细胞M1型极化相关标志物表达较非共培养组显著下降，共培养组CD80+M1型巨噬细胞比例下降(P<0.05,P<0.01)。结论 同种异体肾被膜下移植CD24+肾上皮细胞能够通过旁分泌途径抑制巨噬细胞向M1极化缓解缺血再灌注AKI。
痛痒消洗剂对大鼠感染性创面愈合及IL-1β、IκBα/p65表达的影响
王琳月;戚文月;高记华;田茂生;许建成;安永康;目的 探究痛痒消洗剂（TYX）对大鼠感染性创面愈合及对白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB抑制蛋白（IκBα）/p65表达的影响。方法 选取50只大鼠随机分为模型（Model）组，高锰酸钾（PP）组，TYX低、中、高剂量（TYX-L、TYX-M、TYX-H）组，每组10只。建立全层皮肤缺损开放感染模型，各组大鼠予相应药液换药，每日1次，共14 d。观察大鼠创面愈合情况，免疫荧光、免疫组化、Western blot检测肉芽组织p65入核率、IL-1β、p-IκBα/IκBα、p-p65/p65蛋白表达水平。结果 与Model组比较，治疗第7天TYX-M组、TYX-H组创面愈合率均升高（P<0.05）；与Model组、PP组比较，治疗第14天TYX-L组、TYX-M组、TYX-H组创面愈合率升高（P<0.05）。治疗第7天，TYX-M组IL-1β表达较PP组、Model组降低（P<0.05）,TYX-H组p-IκBα/IκBα比值较PP组、Model组降低（P<0.05）,TYX-L组、TYX-M组、TYX-H组p65入核率较PP组、Model组降低（P<0.05）。治疗第14天，TYX-H组、TYX-M组p-p65/p65比值较Model组降低（P<0.05）,TYX-L组、TYX-M组、TYX-H组IL-1β及TYX-H组p-IκBα/IκBα比值较PP组、Model组降低（P<0.05）。结论 TYX促进感染性创面愈合的作用机制可能与抑制核因子-κB信号通路激活、减轻炎症反应相关。
丙泊酚对孕中期大鼠子代的影响
邓元荣;黄晓敏;陈立;目的 探究丙泊酚对孕中期大鼠子代神经元自噬、记忆功能及c PKCγ的影响。方法 取孕14 d的SD大鼠36只，随机分为对照组、丙泊酚组和丙泊酚+cPKCγ抑制剂组，每组12只。每组随机选择10只孕鼠，继续妊娠直至生下子鼠，出生30～34 d子鼠行Morris水迷宫实验；采用蛋白印迹试验检测海马组织中微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）、贝林蛋白-1(Beclin-1)及cPKCγ、生长相关蛋白-43(GAP-43)蛋白表达;采用荧光检测海马组织中自噬相关蛋白ATG7表达。结果 出生后31、32、33、34 d丙泊酚组和丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠逃避潜伏期长于对照组（P<0.05）；和丙泊酚组相比，丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）。和对照组相比，丙泊酚组和丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠穿越平台次数明显减少（P<0.05）；和丙泊酚组相比，丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠穿越平台次数明显增加（P<0.05）。和对照组相比，丙泊酚组和丙泊酚+c PKCγ抑制剂组子鼠在Ⅰ象限停留时间增加（P<0.05），在Ⅱ象限停留时间减少（P<0.05）；和丙泊酚组相比，丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠在Ⅰ象限停留时间减少（P<0.05），在Ⅱ象限停留时间增加（P<0.05）。和对照组相比，丙泊酚组和丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠海马组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、cPKCγ、GAP-43蛋白表达均明显增加（P<0.05）；和丙泊酚组相比，丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠海马组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、cPKCγ、GAP-43蛋白表达均明显减少（P<0.05）。和对照组相比，丙泊酚组和丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠海马组织中ATG7表达均明显增加（P<0.05）；和丙泊酚组相比，丙泊酚+cPKCγ抑制剂组子鼠海马组织中ATG7表达均明显减少（P<0.05）。结论 丙泊酚可导致孕中期大鼠子代认知功能障碍，促进神经元自噬，抑制海马组织中cPKCγ/GAP-43通路激活可能改善子代的认知功能障碍。
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