铜绿假单胞菌多亚单位疫苗组分OprI的免疫效应研究
闫金琼;朱自凡;王亚婷;伍美霖;黄波;吴梓瑜;崔红荣;张月月;张卫军;陈钢;顾江;目的 本研究旨在明确铜绿假单胞菌疫苗亚单位OprI在融合蛋白rePO(PcrV-OprI)中的作用及机制。方法 检测rePO、PcrV和OprI在4℃、25℃、37℃时的体外稳定性；rePO、OprI、PcrV分别免疫小鼠后，检测血清中特异性抗体效价和脾脏中分泌IFN-γ、IL-4的细胞比例；激光共聚焦和流式细胞术检测DC2.4细胞体外摄取各蛋白的水平及其促进小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟的能力；结果 融合蛋白rePO热稳定性明显优于PcrV，其诱导产生的抗PcrV IgG、抗OprI IgG效价均显著高于单体的PcrV及OprI，且rePO免疫诱导的分泌IFN-γ和IL-4的细胞数量也显著高于PcrV及OprI。DC2.4细胞对融合蛋白rePO的摄取率显著高于PcrV，且rePO比PcrV、OprI更能促进小鼠BMDC成熟。结论 OprI在融合蛋白rePO中可显著提高其热稳定性、免疫原性，为成功开发铜绿假单胞菌疫苗打下基础。
类风湿关节炎滑液来源的细胞外囊泡促进HUVEC血管生成
王凯博;徐传皓;田彦斌;滕泰;谭凤梅;张弛;邓红;李妍梦;杨琴;王欣怡;韩梅;目的 探讨类风湿关节炎（RA）患者膝关节滑液中的细胞外囊泡（EVs）对脐静脉内皮细胞血管生成的影响并初步探讨其机制。方法 收集20例RA患者膝关节滑液，以20例骨关节炎（OA）患者的滑液为对照。采用差速超速离心法纯化EVs，用透射电镜和纳米颗粒追踪观察分析EVs的形态和大小。通过Western blot检测EVs的CD9、CD63、细胞色素C (Cyt-c)，及所含血管内皮细胞生长因子(VEGF)、赖氨酰氧化酶(LOX)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。用2种EVs干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，分别以CCK8法、TranswellTM小室试验、细胞划痕实验和Matrigel胶血管生成试验检测HUVEC增殖、迁移和血管生成。用Western blot检测EVs干预对HUVEC中PI3K/AKT通路的影响。结果 RA滑液来源的EVs(RA-EVs)和OA滑液来源的EVs(OA-EVs)均呈杯口状，直径在30～400 nm之间，表达CD63和CD9，不表达Cyt-c。RA-EVs中所携带的VEGF、LOX、MMP2、TNF-α和TGF-β1较OA-EVs多。与OA-EVs干预组相比，RA-EVs显著促进HUVEC增殖、迁移和血管生成，上调PI3K/AKT的磷酸化，而PI3K抑制剂能够抑制EVs诱导的血管生成。结论RA关节滑液中的EVs携带较多的促血管生成和炎症相关的细胞因子和酶，可通过激活PI3K/AKT通路促进血管生成，参与RA病理进展。
齐墩果酸对糖尿病肾病大鼠及NF-κB/caspase-9信号通路的影响
翟倩倩;沈承亮;李燕;曹萌;王涛;覃艳;朱云峰;目的 探索齐墩果酸对糖尿病肾病大鼠肾组织及NF-κB/caspase-9信号通路的影响。方法 建立糖尿病肾病模型大鼠，并将造模大鼠随机分为齐墩果酸低、中、高剂量组、二甲双胍组和模型组，另选健康SD大鼠作为对照组。测定大鼠给药1周、2周、3周时的血糖水平及给药结束后血脂和24 h尿液中尿微量白蛋白（UMA）水平；检测大鼠肾组织病理形态、肾小管、肾小球细胞凋亡情况、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平及肾组织NF-κB/caspase-9信号通路蛋白表达。结果 相较于对照组，模型组大鼠给药1周、2周、3周时的血糖、血脂、UMA、TNF-α及IL-6水平、肾小管及肾小球凋亡细胞比例、肾组织caspase-9蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65增高（P<0.05）。相较于模型组，二甲双胍组及齐墩果酸低、中、高剂量组大鼠肾组织病理损伤均得到改善，给药1周、2周、3周时的血糖、血脂、UMA水平、TNF-α及IL-6水平、肾小管及肾小球凋亡细胞比例、肾组织caspase-9蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65降低，且齐墩果酸各组指标的改变呈剂量依赖性（P<0.05）。结论 齐墩果酸可改善糖脂代谢，减轻糖尿病肾病大鼠肾组织病理损伤，抑制肾小管及肾小球细胞凋亡，并抑制NF-κB/caspase-9通路。
羟基酪醇介导S100A9/TLR4/NF-κB信号通路调节巨噬细胞极化改善烧伤大鼠创面愈合
陈福泰;刘永硕;陈远征;目的 探究羟基酪醇介导巨噬细胞极化对烧伤大鼠创面愈合的影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为烧伤组、羟基酪醇组、羟基酪醇+ov-NC组和羟基酪醇+ov-S100A9组，每组10只。采用金属砝码烧伤法建立烧伤模型。计算创面愈合率；HE染色观察大鼠创面皮肤组织病理形态变化；免疫荧光检测大鼠创面皮肤组织M1和M2型巨噬细胞比例；ELISA检测大鼠创面皮肤组织巨噬细胞炎症因子水平；Western blot检测大鼠创面皮肤组织S100A9/TLR4/NF-κB信号通路表达。结果 与烧伤组相比，羟基酪醇组和羟基酪醇+ov-NC组大鼠创面愈合能力增加且病理损伤改善，M1型巨噬细胞及相关因子减少，M2型巨噬细胞及相关因子增加，S100A9、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达下调；与羟基酪醇组和羟基酪醇+ov-NC组相比，羟基酪醇+ov-S100A9组大鼠创面愈合能力降低且病理损伤加重，M1型巨噬细胞及相关因子增加，M2型巨噬细胞及相关因子减少，S100A9、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达上调。结论 羟基酪醇通过下调S100A9促进烧伤大鼠创面愈合，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活改善M1/M2型巨噬细胞失衡有关。
DLAT在肝癌组织中的表达及其对免疫治疗疗效的影响
张希旺;丁宁;惠佳君;汤继春;丁胜军;目的 探索二羟乙酰转移酶（DLAT）在肝癌组织中的表达及其对免疫治疗疗效影响，为肝癌的预后判断及免疫治疗疗效预测提供新的标志物。方法 通过生物信息学方法对TCGA数据库中肝癌患者的转录组数据、临床病理特征和生存信息进行分析，评估DLAT在肝癌中的表达及其与临床特征的相关性，并进一步分析DLAT表达与免疫浸润、免疫检查点相关基因及免疫治疗响应的关系。结果 DLAT在肝癌组织中高表达，其高表达与较差预后相关（HR=1.63,P=0.006）。在残余肿瘤状态方面，DLAT高表达组的R1&R2比例（4.1%vs 1.2%）显著高于低表达组（P=0.011）。免疫浸润分析显示，DLAT的高表达与Th17、DC细胞、B细胞、T细胞呈负相关，与Th细胞、Tcm、Tem细胞呈正相关。DLAT表达与多个关键免疫检查点基因（PDCD1LG2、HAVCR2、TIGIT和PVR）呈显著正相关。TIDE算法预测显示DLAT高表达组对免疫检查点抑制剂治疗的反应较差。结论 DLAT在肝癌组织中高表达，是肝癌患者预后不良的危险因素，可作为判断肝癌预后及预测免疫治疗疗效的潜在标志物。
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